《地宫笔记之五百龙首》将故事舞台设在人口密集的南京城河底，首次把探秘目标对准一座深藏水下的神秘古墓。热衷于考古研究的王教授（高玉庆 饰）与曹欣欣（杨欣颖 饰）自然不会错过这次千载难逢的机会，而无一技之长的齐小白（刘冠麟 饰）也阴差阳错地加入队伍。三人深入河底地宫，发现这里危险指数与难度系数远超想象，暗流、机关、毒气与未知生物步步紧逼。

地宫核心藏着五百尊龙首雕像，每一尊都暗合风水玄机与古老诅咒。当齐小白无意间触动机关，龙首开始转动，地宫结构随之变幻，尘封千年的秘密逐渐浮出水面。王教授凭借学识解读碑文，曹欣欣负责破解机关，齐小白则用看似笨拙的方式屡次化险为夷。随着探索深入，他们发现这座古墓与南京城的历史传说紧密相连，而五百龙首背后更隐藏着足以改变认知的奇幻力量。

在生死考验中，三人从互不信任到默契配合，最终揭开龙首真相，逃出地宫。影片融合考古、悬疑与奇幻元素，呈现一场惊险刺激的水下冒险。